Biorep 生物流體灌流系統(tǒng)早些是用來(lái)體外檢測(cè)胰島細(xì)胞對(duì)糖分的響應(yīng)能力。其可以多通道同時(shí)檢測(cè)一組胰島細(xì)胞在一定的溫度條件下對(duì)不同濃度的葡萄糖的響應(yīng)。其原理是將灌注液通過蠕動(dòng)泵流經(jīng)存有胰島細(xì)胞的小室中,流出液會(huì)自動(dòng)收集在96孔板內(nèi),用于進(jìn)一步的檢測(cè)。整個(gè)過程都是全自動(dòng)的。
Biorep生物流體灌流系統(tǒng)可以用于體外檢測(cè)胰島細(xì)胞。胰島細(xì)胞在胰腺中是天然的葡萄糖感應(yīng)器。我們所開發(fā)的灌流系統(tǒng)使得胰島細(xì)胞群在一個(gè)溫度可控的環(huán)境下,孵育在不同溶液中(如各種濃度葡萄糖溶液或者促分泌素)。
灌流液在蠕動(dòng)泵壓力下流過存儲(chǔ)有胰島的小室,收集在96孔板里,用于進(jìn)一步分析。96孔板會(huì)根據(jù)所使用的灌流小室的數(shù)量和當(dāng)前的采樣速率自動(dòng)替換。96孔板在采樣過程中通過外部的水或者酒精循環(huán)來(lái)保持在一個(gè)理想的溫度。
Biorep生物流體灌流系統(tǒng)一次性可以容納1-12個(gè)灌流小室,它可以作為評(píng)估胰島活力的一個(gè)有力工具。
目前,該Biorep生物流體灌流系統(tǒng)已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于研究細(xì)胞對(duì)于灌注液體的刺激而表現(xiàn)的分泌能力。其已經(jīng)廣泛用于藥物開發(fā),細(xì)胞功能研究等各個(gè)領(lǐng)域。
特色:
• 觸屏交互界面
• 兼容96孔板(常規(guī)或者深孔)
• 12通道準(zhǔn)確蠕動(dòng)泵
• 準(zhǔn)確的氣體溫控箱體
• 96孔板冷卻系統(tǒng)
• 自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)
• 個(gè)性化操作方式運(yùn)行
• 具有全自動(dòng)或者半自動(dòng)版本
技術(shù)特點(diǎn):
1. 同一個(gè)實(shí)驗(yàn)中可以使用高達(dá)八個(gè)不同的刺激物
2. 自動(dòng)化的多通道閥門可以根據(jù)預(yù)先設(shè)定好的實(shí)驗(yàn)方法,給四個(gè)重復(fù)流出通道的每個(gè)通道選擇所需的刺激液源頭
3. 高精度的蠕動(dòng)泵把刺激物從刺激液源頭泵到灌流小室中去
4. 研究過程中八個(gè)灌流小室起到固定細(xì)胞的作用,灌流液除了刺激細(xì)胞的外,還把細(xì)胞分泌出來(lái)的代謝產(chǎn)物沖走。
5. 所有的刺激液都在一個(gè)密閉的容器內(nèi),就像灌流小室一樣,從而確保了溫度的均一性。
6. 流出物是以多孔板收集用于進(jìn)一步研究的。依據(jù)使用的灌流小室的數(shù)量和預(yù)先設(shè)定的取樣速率,收集板自動(dòng)轉(zhuǎn)移更換。
7. 多孔板是處于冷卻狀態(tài)的,避免了流出物中待測(cè)物的降解
胰島是胰腺的內(nèi)分泌腺中負(fù)責(zé)維持血糖濃度的重要組成部分。胰島主要由分泌型內(nèi)分泌細(xì)胞組成,包括:α細(xì)胞,β細(xì)胞,δ細(xì)胞,和胰島PP細(xì)胞。其中α細(xì)胞和β細(xì)胞是絕大多數(shù)物種胰島中含量豐富的細(xì)胞,分別分泌胰高血糖素和胰島素。δ細(xì)胞分泌體細(xì)胞素,用來(lái)調(diào)節(jié)α和β細(xì)胞的功能??偠灾?,α,β,δ細(xì)胞協(xié)同分泌的三種激素對(duì)于維持葡萄糖平衡是極其重要的。
不同胰島細(xì)胞中的自分泌和旁分泌信號(hào)主要負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)和優(yōu)化胰腺內(nèi)分泌腺的整體功能。因此評(píng)價(jià)胰島是否健康,以及其功能狀況無(wú)論對(duì)于科學(xué)實(shí)驗(yàn)還是臨床應(yīng)用都是極其重要的。
目前已經(jīng)有好幾種方法用來(lái)評(píng)價(jià)胰島細(xì)胞的活性。這些檢測(cè)方法已經(jīng)提高了我們甄別胰島的能力,從而選取合適的胰島用于臨床移植。
胰島活性的量化是一個(gè)基本的檢測(cè)方法,它可以顯著影響科學(xué)實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用的結(jié)果。然而,胰島活性也并不一定能夠完全反映出它的功能狀態(tài)。所以確定胰島的功能狀態(tài)對(duì)于其臨床前和臨床環(huán)境下都是必須的。評(píng)估胰島功能狀態(tài)的一個(gè)重要方面就是檢測(cè)胰島細(xì)胞在各種刺激條件下所分泌出來(lái)的激素和其他物質(zhì)。這對(duì)于胰島生理學(xué)的研究尤其重要。
研究胰島生理學(xué)的一個(gè)重要指標(biāo)就是檢測(cè)胰島細(xì)胞在響應(yīng)各種刺激條件下胰島素分泌的情況。目前針對(duì)體外分離出來(lái)的原代胰島細(xì)胞的分泌情況的檢測(cè)主要有兩種方式:
第一種是靜置孵育法(in vitro static incubation),也是目前國(guó)內(nèi)基礎(chǔ)研究中比較常用的針對(duì)動(dòng)物模型所采用的胰島β細(xì)胞功能評(píng)估方法,主要就是在分離胰島后,分別在培養(yǎng)皿中使用低糖、高糖孵育一定時(shí)間段,取其上清液測(cè)定胰島素濃度。
第二種是體外灌流(in vitro perifusion),:就是將離體胰島置于灌流系統(tǒng)中,該系統(tǒng)保持37°恒溫,并通過將微量泵輸注系統(tǒng)與放置胰島的小室連接,以恒定的速率把各種刺激液灌流過放置胰島的小室,不同時(shí)間點(diǎn)收集灌流出的液體。
第一種方法反映在給予葡萄糖負(fù)荷后一定時(shí)問內(nèi)分泌的胰島素的總量。但不能反映出胰島素分泌時(shí)相和分泌數(shù)量方面的變化,僅能代表胰島素分泌總量,而非真正β細(xì)胞的功能,
此外灌流比靜置孵育有個(gè)非常大的好處在于在生物流體灌流系統(tǒng)中,刺激物會(huì)不間斷流入,把處于小室中的細(xì)胞或細(xì)胞群所分泌的代謝物沖走。而在靜置孵育中,這些代謝物會(huì)累積從而影響到研究結(jié)果。因此需要一種更為理想的手段來(lái)從分泌時(shí)相和分泌數(shù)量?jī)蓚€(gè)方面評(píng)價(jià)胰島素分泌功能。而第二種方法恰好滿足了這種需求。
準(zhǔn)確反映胰島β細(xì)胞功能的胰島素的分泌模式變化較為復(fù)雜,存在分泌量和時(shí)限的變化,這一分泌模式使得用胰島素分泌總量來(lái)描述細(xì)胞功能變得十分困難。胰島素分泌的量不等同于β細(xì)胞功能,胰島β細(xì)胞功能的改變是“由質(zhì)及量”的動(dòng)態(tài)變化。因?yàn)榉置诹肯嗤锌赡芊置谶_(dá)峰時(shí)間可有不同,如糖耐量正常者與糖耐量減低者相比較,胰島素分泌量低者不等同于β細(xì)胞功能差;胰島素分泌量高于正常也不等同于β細(xì)胞功能亢進(jìn)。若以胰島素分泌總量來(lái)評(píng)估β細(xì)胞功能,容易發(fā)生誤判。
使用離體胰島灌流系統(tǒng),能夠從分泌時(shí)相和分泌數(shù)量?jī)蓚€(gè)方面對(duì)胰島功能進(jìn)行綜合評(píng)價(jià),是一種較理想的檢測(cè)手段,在胰島基礎(chǔ)研究中可以得到廣泛應(yīng)用。
研究人員可以根據(jù)上述示意圖手工建立離體胰島灌流系統(tǒng),需要確保輸注系統(tǒng)工作運(yùn)行正常,各管道系統(tǒng)無(wú)滲漏,引流口引流正常,溫度控制,流速控制,以及流出液的收集都需要得到保證,這樣才能夠更加準(zhǔn)確地得到胰島素分泌的動(dòng)態(tài)曲線圖,準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)胰島的功能。
Biorep生物流體灌流系統(tǒng)(Biorep Perifusion System)就是為了滿足這樣的需求而研發(fā)的出產(chǎn)品。它可以對(duì)分泌型細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)化細(xì)胞分泌分析。
這個(gè)系統(tǒng)顯著地增進(jìn)了細(xì)胞分泌分析的處理能力和可重復(fù)性。大大提高了分泌實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,減少了實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)誤差。
Biorep生物流體灌流系統(tǒng)
美國(guó)Biorep技術(shù)有限公司(Biorep Technologies Inc.)與邁阿密大學(xué)糖尿病研究所(Diabetes ResearchInstitute at the University of Miami)合作開發(fā)的自動(dòng)化生物流體灌注系統(tǒng),極大地簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程,實(shí)現(xiàn)了全面的環(huán)境控制,刺激不同細(xì)胞類型,并通過編輯程序來(lái)自動(dòng)收集分泌物。經(jīng)過測(cè)試,Biorep生物流體灌注系統(tǒng)被證明是非常有價(jià)值的,可以用于胰島移植前,在體外小室內(nèi)檢測(cè)人胰島的活性,準(zhǔn)確反應(yīng)出胰島素分泌的時(shí)項(xiàng)性。
目前,已有很多實(shí)驗(yàn)室和制藥公司定期采用該系統(tǒng)來(lái)研究胰島細(xì)胞的激素分泌。但是Biorep 生物流體灌注系統(tǒng)并不僅限于用在胰島分泌的研究。它還可用來(lái)測(cè)定其他類型細(xì)胞的分泌,包括諸如,干細(xì)胞,脂肪細(xì)胞,嗜鉻細(xì)胞,干細(xì)胞等細(xì)胞。這就讓它更成為了醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)藥物研發(fā)過程中不可或缺的一部分。
利用biorep灌流系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)方法學(xué)可以參考
http://www.nature.com/protocolexchange/protocols/2212#/procedure