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　　1.介紹

　　ibidi泵系統(tǒng)/流體剪切力系統(tǒng)是專為灌注條件下的長期細胞調(diào)節(jié)而設計。標準方法是將一個載玻片連接到一個灌注裝置。在某些情況下，增加載玻片（細胞）的數(shù)量可能是有用的。例如，當計劃進行各種染色時，或者如果細胞數(shù)量對于后續(xù)的應用（如FACS）不夠時。

　　本應用是一個循序漸進依次連接µ-Slide VI0.4六通道載玻片的實驗方案。

　　重要提示！

　　串聯(lián)的通道承受著幾乎相同的流速，因此剪切應力也幾乎相同。

　　我們強力建議串聯(lián)通道載玻片，而不是并聯(lián)！

　　我們建議按所述方式連接不要超過兩個µ-Slide VI0.4 六通道載玻片

　　2.材料

　　對于設置，需要以下材料(無菌):

　　* 串聯(lián)連接管(ibidi #10830)，5 pieces

　　* 細胞培養(yǎng)基

　　* 接種了細胞的ibidi µ-Slide VI 0.4

　　* 灌流管

　　* 1 ml注射器

　　* 軟管夾

　　* 移液吸頭

　　重要提示！

　　將串聯(lián)連接管、細胞培養(yǎng)基、通道載玻片和灌注裝置在培養(yǎng)箱中平衡一整晚!

　　本方案的所有步驟都應在無菌條件下完成!

　　3.準備工作

　　整個設置相當于只有一個通道的標準實驗。 唯一的區(qū)別是，在將整個組件連接到Perfusion Set之前，先將多個通道串行連接起來。

　　3.1.接種細胞

　　像往常一樣在µ-Slide VI 0.4的通道中接種細胞。如果需要進一步的靜態(tài)培養(yǎng)，讓細胞附著并在附著后用60µl無細胞培養(yǎng)基填充儲液池。詳細說明見“使用ibidi流體剪切力系統(tǒng)培養(yǎng)內(nèi)皮細胞實驗方法匯總”。細胞貼壁后，就可以進行載玻片的串連了。

　　3.2.泵設置

　　按照“使用ibidi流體剪切力系統(tǒng)培養(yǎng)內(nèi)皮細胞實驗方法匯總”中的說明準備泵的設置。向灌流管的儲液池中各注入5ml平衡介質(zhì)，并以中壓(約50mbar)運行泵，去除氣泡。

　　重要提示！

　　將公魯爾接頭連接到母魯爾接頭時，務必小心不要帶進氣泡。

　　盡可能快地工作，以避免載玻片和細胞冷凝。整個過程必須在10分鐘內(nèi)完成。

　　4.串聯(lián)連接

　　通道的串聯(lián)連接是在細胞貼壁后和將載玻片連接到灌注管之前完成。

　　按照第3部分的描述準備載玻片，接種細胞并貼壁        如圖所示，將五個串行連接管連接到Luer端口

　　用無細胞培養(yǎng)基填充注液孔，直到所有注液孔完全充滿    在此步驟中，注意注液孔底部不能有氣泡

　　注意不能在注液孔中留有氣泡

　　用1ml的無菌注射器吸滿培養(yǎng)基，小心插入如圖的孔中，不要引入氣泡。

　　小心慢慢注入培養(yǎng)基，直到第一個串聯(lián)管有培養(yǎng)基微微冒出

　　小心的將串聯(lián)管彎過來，插入相鄰的Luer端口中。不要產(chǎn)生氣泡。

　　繼續(xù)推動注射器，直到第二根串聯(lián)管也被充滿，繼續(xù)推動注射器充滿下一根串聯(lián)管。

　　重復上面的操作，繼續(xù)充滿所有的通道和串聯(lián)管。

　　將所有的串聯(lián)管連接好后，將加滿液體排除氣泡的灌流管用軟管夾夾住。

　　從灌流管的母魯爾鎖定耦合器中拔出公魯爾接頭，并將其插入載玻片上末尾一個Luer端口中。在慢慢抽出注射器，用新鮮的培養(yǎng)基填滿Luer端口并去除氣泡

　　從灌流管的母魯爾鎖定耦合器中拔出第二個公魯爾接頭，并將其插入載玻片上另一端末尾的Luer端口

　　設置完成，可開始啟動實驗。別忘了取下軟管夾！

　　串聯(lián)灌流系統(tǒng)搭建完成。

　　5.調(diào)整流速

　　軟件中無法預見多個通道載玻片的設置。需要調(diào)整泵的參數(shù)以適應新的要求。作為指南您可以在軟件中選定正在使用是µ-Slide VI0.4通道載玻片。由此產(chǎn)生的流速(以及剪切應力)將低于在單通道的應用中。用所需的剪切應力啟動一個循環(huán)，手動測量流速(ibidi Pump Instructions, page 40（可聯(lián)系我們索要電子版文檔）)。然后進入重新校準對話框，輸入計算的（軟件給定的流速）和測量的流速。