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　　1.介紹

　　本應(yīng)用逐步說(shuō)明了如何串聯(lián)連接多個(gè)Luer-Slides。優(yōu)點(diǎn)是僅使用一個(gè)流體單元即可觀察和培養(yǎng)多個(gè)載玻片。當(dāng)使用相同規(guī)格的載玻片時(shí)，載玻片中的流速是相同的。也可以通過(guò)連接不同高度的載玻片來(lái)改變剪切速率（例如，µ-Slide I0.2Luer和µ-Slide I0.4Luer）。

　　本次介紹了兩個(gè)載玻片連接的過(guò)程。但是它可以應(yīng)用于大量的載玻片。

　　2.材料

　　載玻片：2片 µ-Slides I 0.6Luer, ibiTreat                ibidi (80186)

　　細(xì)胞：Endothelial cells (2.5 · 105 per slide)          e.g. Promocell

　　培養(yǎng)基：Endothelial Cell Growth Medium            e.g. Promocell

　　連接器：Serial Connector                                      ibidi (10830)

　　注射器：帶簡(jiǎn)單Luer適配器的無(wú)菌注射器（5 ml）

　　串行連接器：

　　管道：Silicone Tubing 1.6 mm ID                           ibidi (10842)

　　適配器：Luer Connector Male                                 ibidi (10824)

　　將一個(gè)塑料連接器插入通道載玻片的兩端（6厘米），以在載玻片之間連接起來(lái)。下圖是在兩端帶有兩個(gè)配套的Luer公接頭的連接器管。可用乙醇或高壓滅菌消毒接頭。

　　必須在無(wú)菌條件下執(zhí)行以下步驟！

　　3. 播種細(xì)胞

　　· 準(zhǔn)備1.67 · 106 cells/ml.的細(xì)胞懸液。

　　· 將150 µl注入通道。僅填充通道體積（圖1a）。

　　· 將帽蓋在Luer接頭上，并將載玻片放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)半小時(shí)來(lái)固定細(xì)胞。

　　· 細(xì)胞固定后，將兩邊儲(chǔ)液接口各加60 µl充滿(mǎn)。

　　4. 連接載玻片

　　現(xiàn)在準(zhǔn)備載玻片，使細(xì)胞在通道中生長(zhǎng)，并向儲(chǔ)液池中填充60 µl無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基（請(qǐng)參見(jiàn)第3節(jié)）。

　　· 在連接之前，將所有儲(chǔ)液器各加60 µl（圖1b）。

　　· 將連接器管的一個(gè)Luer適配器插入載玻片的一個(gè)母Luer適配器中（圖1c）。

　　· 將一些預(yù)備的培養(yǎng)基吸入注射器。倒轉(zhuǎn)注射器并將多余的空氣推出（圖1d）。

　　· 使用沒(méi)有氣泡的注射器在載玻片端口注入。可能會(huì)有些溢出（圖1e）。

　　小心地將液體注入載玻片，直到連接器管中充滿(mǎn)為止（圖1f）

　　圖1：（a）接種細(xì)胞時(shí)的用量； （b）載玻片在連接之前已完全填滿(mǎn)； （c）載玻片中插入連接管； （d）無(wú)氣泡的注射器； （e）將注射器插入載玻片一端； （f）用注射器推動(dòng)介質(zhì)來(lái)填充連接器管道

　　· 當(dāng)連接器管道完全充滿(mǎn)時(shí)（圖2a），將其插入第二張載玻片的接口上（圖2b-d）。

　　· 如果要連接兩個(gè)以上的載玻片，將第二個(gè)連接器管放在第二個(gè)載玻片空的另一端口上，用注射器推入介質(zhì)，依此類(lèi)推。

　　· 慢慢連接的所有載玻片將注射器從適配器上卸下（圖2e）。

　　· 要將載玻片連接到灌注套件，兩個(gè)Luer容器必須在頂部填充培養(yǎng)基?？捎眉埥聿寥ミ^(guò)多的培養(yǎng)基。

　　圖2：（a）連接管已完全充滿(mǎn)； （b-c）將連接器管插入第二載玻片的魯爾接頭上； （d）帶有適配接頭管連接； （e）取下注射器； （f）擦去溢出的介質(zhì)，并填充儲(chǔ)液罐以連接到灌注套件。

　　5. 連接到灌注裝置

　　將載玻片連接到灌注套件

　　圖片串聯(lián)安裝帶有兩個(gè)µ-Slides I Luer的一個(gè)流體單元