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　　免疫熒光技術（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。

　　

　　細胞免疫熒光實驗你是怎么做的？

　　

　　還在用小玻片，先泡酸、再晾干、再 coating、再種細胞、染色、封片成像？

　　

　　

　　

　　

　　免疫熒光一體化新方法介紹，先養(yǎng)細胞、然后直接固定、染色、成像，在培養(yǎng)皿/玻片上全部搞定！能幫您把細胞養(yǎng)好、又幫您省時省力的獲得漂亮的成像結(jié)果（見圖 1）！

　　

　　

　　

　　2.ibidi 產(chǎn)品底部媲美蓋玻片厚度，為高分辨率顯微成像而設計的光學特性

　　

　　德國 ibidi 公司創(chuàng)新的μ-Slide 與μ-Dish 系列產(chǎn)品，與一般市面上常見的細胞培養(yǎng)皿不同，其底部是由獨特的塑料制成，具有與玻璃材質(zhì)媲美的高光學穿透與低背景熒光等特性。相較于一般細胞培養(yǎng)產(chǎn)品（圖 2 左），ibidi 產(chǎn)品（圖 2 右）底部構(gòu)造厚度符合 No.1.5 標準蓋玻片厚度（180 μm），用高倍鏡物鏡觀察，可以使焦距集中在待測樣本上，產(chǎn)生良好的成像結(jié)果。

　　

　　

　　3.ibidi 產(chǎn)品底部化學耐受性強，適用于多種常用的細胞固定劑（見圖 3）圖 3.ibidi 產(chǎn)品底部適用的溶劑列表

　　

　　

　　細胞進行生長、發(fā)育和信號傳遞很大程度上取決于細胞容器的表面處理方式。ibidi 產(chǎn)品底部相比于普通培養(yǎng)皿更加平滑（見圖 4）。目前，ibidi 產(chǎn)品μ-Slides 和μ-Dishes 有標準底、玻璃底以及多種底部預包被的產(chǎn)品，適用于培養(yǎng)不同的細胞類型，不同底之間的比較。

　　

　　ibidi 標準底具有親水超薄的特性，該底部的光學特性符合多種成像技術的要求，如相差、共聚焦和雙光子顯微成像。

　　

　　ibiTreat，作為 ibidi 受歡迎的表面處理方式，通過了大量不同細胞系和原代細胞培養(yǎng)測試，且已發(fā)表的 2000 多篇使用了 ibidi 產(chǎn)品的期刊論文中，超過 90% 使用了 ibiTreat，表明大多數(shù)細胞在 ibiTreat 下生長良好，無需進行額外的表面處理。ibiTreat 是一種物理修飾的表面處理方式，讓耗材表面親水，利于絕大多數(shù)種類的細胞貼壁，可與其他標準細胞培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿相媲美。

　　

　　

　　圖 4. AFM（原子力顯微技術）測量表面粗糙度。ibidi 產(chǎn)品（右下）比普通培養(yǎng)皿具有更平滑的底部構(gòu)造，更加的成像效果。

　　

　　ibidi 標準底也有疏水、無包被的表面可以選擇。可以根據(jù)具體的實驗需求，進行特定的包被，或者直接用來培養(yǎng)非貼壁細胞。

　　

　　Ibidi 也有玻璃底的產(chǎn)品。玻璃底可以直接培養(yǎng)細胞，但可能需要進行表面處理來促進細胞更好的貼壁。ibidi 研發(fā)的玻璃底產(chǎn)品尤其適用于 TIRF、單光子及單分子應用。

　　

　　基于以上特殊的底部構(gòu)造，ibidi μ-Dish，μ-Slide 以及μ-plate 等產(chǎn)品都既適用于常規(guī)細胞培養(yǎng)，又可以簡化免疫熒光實驗步驟、節(jié)約實驗時間，并且獲得理想的顯微成像效果。

　　

　　

　　

　　在此基礎上，如果需要進行更佳的相差或者高的顯微鏡成像實驗，如進行實時的活細胞不同位點的掃描，μ-Slides well ph+系列產(chǎn)品更適合您。在傳統(tǒng)的μ-Slides well 的孔的中間，ph+產(chǎn)品加了一層特殊的平板（見圖 6），這層平板可以有效避免開放小室中影響相差成像效果的凹液面的形成。在這層平板與 well 的四周有縫隙，方便向其中加入細胞及換液等操作。

　　

　　

　　

　　

　　一體化小室產(chǎn)品還包括μ-Slide channel 系列產(chǎn)品（圖 7A），這類產(chǎn)品有通道式的細胞培養(yǎng)空間，同樣具有 ibidi 標準底，適合于高分辨率顯微成像。產(chǎn)品兩端有魯爾接頭，可應用于流體剪切力實驗，即在培養(yǎng)基流動狀態(tài)下就行細胞培養(yǎng)。

　　

　　在開放小室中鋪細胞時，通常依賴于人為晃動操作，對于新手尤其容易使細胞聚團，導致細胞分布不均（圖 7C）。而通道式的設計，巧妙回避這一問題，只需要向通道中加入細胞懸液，無需晃動（圖 7B），輕松使細胞在通道中均勻分布（圖 7D）。另外當需要進行準確的少量試劑換液時，或者試劑、抗體珍貴，μ-Slide channel 系列產(chǎn)品將是理想選擇。

　　

 

　　

　　圖 7. μ-Slide channel 系列產(chǎn)品。A，μ-Slide I 及μ-Slide IV 產(chǎn)品圖示。B，μ-Slide I 為例說明系列產(chǎn)品適用步驟，向通道中加入 100 ul 細胞懸液，向一側(cè)儲液池中加入無細胞的培養(yǎng)液，向另一側(cè)儲液池中加入無細胞的培養(yǎng)液，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。C，開放小室的細胞分布，依賴于晃動操作，經(jīng)常會分布不均勻。D，channel 中細胞的分布，由于其獨特的集合設計，使細胞非常容易的均勻分布在通道中。

　　

　　

　　

　　考慮到有些用戶希望保存標本，ibidi 公司還開發(fā)了 removable 的硅膠培養(yǎng)載玻片（圖 8A），用于細胞培養(yǎng)和顯微成像。將硅膠材料插件移除后，可以封片進行長期保存。

　　

　　

　　

　　另外，ibidi 公司還開發(fā)了 Sticky 的 well 及通道（圖 8B-D）。這類產(chǎn)品通用性強，可與多種多樣的底部材料粘貼。而且對于不易放入通道培養(yǎng)的細胞、組織等，可以選擇先放在底部材料上，再將培養(yǎng)通道粘貼到其上進行實驗。

　　

　　

　　

　　易必迪 ibidi 公司專注于細胞培養(yǎng)及功能實驗的耗材及儀器開發(fā)，產(chǎn)品設計巧妙，適用于各種各樣的實驗需求，簡化實驗步驟，節(jié)約實驗時間。

　　

　　如果您也在培養(yǎng)細胞，也在做細胞免疫熒光實驗，也在做細胞功能實驗，那么快來試試 ibidi 系列產(chǎn)品吧，讓您實驗變得輕松簡單，事半功倍！